1. Co zahrnují neklinické studie?
Odpověď:Neklinické experimenty zahrnují farmakologické studie, obecné testy toxicity, toxikokinetiku a neklinické farmakokinetické experimenty, testy reprodukční toxicity, testy genotoxicity, karcinogenity a další testy (fototoxicita, závislost, imunotoxicita) atd. V případech kombinované terapie mohou být také provedeny neklinické studie bezpečnosti kombinované terapie. Pro určitý vysoký podíl (více než 10 % celkové systémové expozice a úroveň expozice ve studiích na zvířatech je nižší než expozice u člověka) může být požadováno provedení neklinických studií bezpečnosti metabolitů.
2. Jaký je účel neklinického hodnocení bezpečnosti?
Odpověď:Účel neklinického hodnocení bezpečnosti obecně zahrnuje objasnění charakteristik reakce toxicity související s cílovými orgány, závislostí na dávce, vztahem k expozici a potenciální reverzibilitou. Tyto informace lze použít k odhadu bezpečné počáteční dávky a rozmezí dávek pro klinické studie na lidech (jak již bylo zmíněno dříve, NOAEL je třeba získat v toxikologických experimentech pro výpočet MRSD, maximální doporučené počáteční dávky) a ke stanovení indikátorů klinického monitorování potenciálních nežádoucích reakcí.
3. Jaké neklinické studie jsou vyžadovány pro první-v-testech na lidech?
Odpověď:U této otázky je nejprve nutné si ujasnit typ léku. ICH M3 (R2) je použitelný v běžných situacích při vývoji léků a poskytuje obecné pokyny. U biologických látek by měly být provedeny neklinické studie podle požadavků ICH S6.
⑴Farmakokinetika:Před předložením IND jsou dostatečné údaje o metabolismu hodnoceného přípravku u různých druhů a údaje o metabolismu in vitro u lidí, stejně jako o rychlosti vazby na plazmatické proteiny. Před rozsáhlými klinickými studiemi (obvykle fáze 3) by měly být dokončeny informace o absorpci, distribuci, metabolismu in vivo a vylučování. Experimenty s absorpcí PK se obecně provádějí u více druhů před předložením IND a stanovením PCC, aby bylo možné lépe porozumět PK charakteristikám léčiva u různých druhů, i když to zde není vyžadováno, což je trochu zvláštní.
⑵Bezpečnostní farmakologie:Vyhodnocení účinků na kardiovaskulární, centrální nervový a dýchací systém by mělo být dokončeno před předložením IND, což je kombinace standardních testů farmakologické bezpečnosti. V případě potřeby mohou být během klinických studií provedeny doplňkové bezpečnostní farmakologické experimenty.
⑶Toxicita opakované dávky:Obecně platí, že krátkodobý-test chronické toxicity je uspořádán na základě schématu časného dávkování IND. Pokud je třeba dávkovací období prodloužit později, je k jeho podpoře vyžadován dlouhodobější-test chronické toxicity.
⑷Genotoxicita:S relativně nízkou cenou lze kombinaci testu genotoxicity dokončit před předložením IND.
⑸Karcinogenita:Testování karcinogenity by mělo být dokončeno před schválením léku.
⑹Toxicita pro reprodukci:Pozorování a hodnocení reprodukčního systému by měly být zahrnuty do testů toxicity po opakovaných dávkách před předložením IND k předběžnému posouzení reprodukční toxicity, přičemž postačuje přísná antikoncepce v klinických studiích. Studie reprodukční toxicity fáze I/II by měly být dokončeny před velkými-klinickými zkouškami a studie reprodukční toxicity fáze III by měly být dokončeny před schválením.
⑺Fototoxicita:Posouzení fototoxicity by mělo být dokončeno před předložením IND. Je-li molární absorptivita větší než 1000 M-1cm-1, má se za to, že existuje riziko fototoxicity, a před rozsáhlými klinickými studiemi by mělo být provedeno testování fototoxicity.
4. Jak by měly být stanoveny dávky v toxikologických testech? Jak vybrat nejvyšší dávku?
Odpověď:S odkazem na „Zásady technických pokynů pro testy toxicity po opakovaných dávkách léků“ „V zásadě by vysoké dávky měly vyvolat zjevné toxické reakce u zvířat, nízké dávky by měly být ekvivalentní nebo vyšší než efektivní dávka u zvířat nebo klinické použití a střední dávky by měly být nastaveny mezi vysoké dávky a nízké dávky na základě toxického mechanismu a charakteristik, aby bylo možné zkoumat vztah mezi dávkou-odezva a toxicita.“
V praxi je vzhledem k drahým nákladům na toxikologické testy provedení testu{0}}na zjištění rozsahu dávek (DRF) s několika ne-lidskými primáty tou nákladově-nejefektivnější a pracnější-metodou. Dávka pro testy DRF by měla být dále stanovena na základě předběžných studií bezpečnosti provedených během časného stanovení PCC a farmakologických studií. Mnoho institucí nyní také provádí testy akutní toxicity spolu s testy DRF, což jsou testy nesplňující-GLP, jak je uvedeno v M3 (R2), podle principu 3R, aby se snížilo používání zvířat.
Pro skupiny s nízkou, střední a vysokou dávkou se obecně používá rozestup 2-3krát. Ve formálních toxikologických testech je ideální situace, kdy skupina s vysokou dávkou může vykazovat zjevnou toxicitu a skupiny s nízkou nebo střední dávkou lze použít jako NOAEL.
Navíc pro výběr nejvyšší dávky poskytuje M3 (R2) také standardní odpovědi. Jednoduše řečeno, nejvyšší dávka v toxikologii by měla být buď maximální tolerovaná dávka (MTD) nebo maximální možná dávka (MFD, kterou lze chápat jako maximální dávku, kterou mohou zvířata tolerovat na základě vlastností produktu a zvířete), nebo by měla dosáhnout saturace expozice, nebo by úroveň expozice měla být dostatečně vysoká (dosahující 50násobku zamýšlené klinické dávky). Obecně je 1000 mg/kg/den považováno za dostatečné, pokud zamýšlená klinická dávka nedosáhne 1g/den a expoziční hladina 1000 mg/kg nedosáhne 10násobku klinické expoziční úrovně, v takovém případě je třeba dále zvýšit dávku na 10násobek klinické expoziční úrovně nebo 2000 mg/kg/den, neboli MFD.
5. Které studie v neklinickém výzkumu bezpečnosti musí dodržovat SLP a které ne?
Odpověď:Farmakologické a farmakokinetické studie se nemusí řídit zásadami GLP, zatímco studie farmakologie bezpečnosti, genotoxicity, reprodukční toxicity a toxicity po opakovaném podávání se musí řídit zásadami GLP.
6. Jak dlouho trvají neklinické studie toxicity po opakovaných dávkách?
Odpověď:Požadavky na dobu trvání pro podporu provádění klinických hodnocení a schválení pro uvedení na trh se liší a musí být specifické pro období dávkování klinických hodnocení. Například pro pacienty s roztroušenou sklerózou je minimální plánovaná doba klinického hodnocení dva roky. Proto je při zařazování pacientů s roztroušenou sklerózou do klinických studií vyžadována 6-měsíční studie chronické toxicity na hlodavcích a 9-měsíční studie chronické toxicity na jiných než-hlodavcích, což je dostatečné pro schválení na trhu. U ne-onkologických léků se obecně používá čtyřtýdenní studie chronické toxicity, která podporuje období dávkování nepřesahující 4 týdny u prvních klinických studií u člověka.
7. Jak vybrat experimentální zvířata pro neklinické hodnocení bezpečnosti?
Odpověď:Obecně se používají dva typy zvířat, preferovanou volbou jsou hlodavci, u nichž jsou potkani, a ne-hlodavci s preferovanou volbou bíglů. Samozřejmě by se měly dodržovat také zásady analýzy-specifické pro konkrétní produkty. U malých molekul by se při výběru druhů měly brát v úvahu především metabolické charakteristiky hodnoceného produktu u zvířat, která jsou podobná lidem. Lze odkázat na „Analýzu a identifikační test metabolitů výzkumných produktů u myší CD-1, potkanů SD, psů bíglů, opic Cynomolgus a lidských jaterních mikrozomů“, který vybírá druhy s metabolickými charakteristikami podobnými lidem, to znamená druhy s podobnými množstvími a typy metabolitů jako lidé. Kromě toho by vybrané druhy měly být citlivé na zkoumaný přípravek. Na základě minulých zkušeností mohou být u léčiva s malou molekulou jeho metabolické vlastnosti u psů bígla podobné jako u lidí, ale s nízkou expozicí.
